實(shí)驗材料：
基礎培養基
血清（常規為FBS/NBS）
電動(dòng)移液槍
移液管[NEST]
無(wú)冰冰盒[NEST]
T25培養瓶[NEST]
自動(dòng)旋蓋機[NEST]
盒裝無(wú)菌吸頭[NEST]
100mm細胞培養皿[NEST]
15mL、50mL無(wú)菌離心管[NEST]
不能忘記的準備：
1.記得一定要預定干冰?。?！不然你細胞取出來(lái)可沒(méi)地方待了，要是液氮罐距離實(shí)驗室遠點(diǎn)，你的細胞可能就沒(méi)了。
2.用來(lái)轉移細胞的無(wú)冰冰盒一定要滅菌?。?！當然，如果條件刻苦點(diǎn)的泡沫盒，也不要偷懶，無(wú)論什么裝載容器，都要提前滅菌，可以有效規避污染風(fēng)險。
3.水浴鍋提前預熱至37℃。
4.培養基預熱至37℃。
要開(kāi)始了?。ㄇ煤诎澹?span lang="EN-US">
1.在生物樣本庫中搜尋到目標細胞,在液氮罐找到對應的細胞，放入預先準備好的無(wú)冰冰盒（容器）內。冰盒內裝有碎干冰，冰芯的鋁合金外殼協(xié)同高導熱的合金模塊，確保樣品能快速冷卻，孔之間的溫度差異小于0.1℃，能很好的維持樣品間的溫度一致性。
2.在細胞進(jìn)入水浴鍋解凍前，務(wù)必將凍存管豎直立在桌面上10~20s，這樣之后，可能排空存在在凍存管蓋縫隙內的液氮。尤其是外旋蓋的凍存管，特別要注意！不然在水浴解凍的時(shí)候有概率會(huì )砰的一聲爆發(fā)出來(lái)！極為危險。
3.將凍存管在37℃水浴鍋內水浴解凍，因為DMSO在常溫情況下對細胞有毒副作用，若解凍時(shí)間過(guò)長(cháng)，會(huì )導致細胞損傷并影響其存活率，所以一定要快，解凍過(guò)程在1~2min內完成。
4.解凍完成后，在生物安全柜內，用自動(dòng)旋蓋機打開(kāi)凍存管，之后在移液槍將凍存管內細胞復懸，然后將細胞懸液轉移至含有5~10ml培養基的離心管中，1000rmp離心5min（根據各自細胞的特新調整離心力和離心時(shí)間）。如果沒(méi)有培養基稀釋?zhuān)陔x心過(guò)程中較高濃度的DMSO會(huì )對細胞損傷，影響活存活率！
5.丟棄上清，里面還有DMSO和死去細胞的裂解產(chǎn)物，這不是我們所需要的。將剩余的細胞用培養基稀釋復懸，稀釋比例為1:10~1:15，再按照大家各自實(shí)驗需求，分裝到100mm培養皿或者T25瓶中，顯微鏡觀(guān)察細胞狀態(tài)，然后轉移至細胞培養箱中培養。
復蘇后的注意點(diǎn)：
復蘇后記得每天都要觀(guān)察細胞狀態(tài)，及時(shí)更換培養基，確保細胞所需營(yíng)養的充足和生長(cháng)環(huán)境的清潔。
使用到的NEST產(chǎn)品：
移液管[NEST]
無(wú)冰冰盒[NEST]
T25培養瓶[NEST]
自動(dòng)旋蓋機[NEST]
盒裝無(wú)菌吸頭[NEST]
100mm細胞培養皿[NEST]
15mL、50mL無(wú)菌離心管[NEST]
